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聚丙烯酰胺凝膠的變性與非變性

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聚丙烯酰胺凝膠的變性與非變性

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聚丙烯酰胺凝膠的變性與非變性

聚丙烯酰胺凝膠是一種合成凝膠，由亞甲基雙丙烯酰胺以丙烯酰胺為單位交聯(lián)，干燥、粉碎或加工成顆粒，通過(guò)控制交聯(lián)劑的用量可以制成各種類(lèi)型的凝膠。交聯(lián)劑越多，孔隙越小。聚丙烯酰胺凝膠的商業(yè)產(chǎn)品是Bio-Gelp，是日本tosoh的TSKGEL的pw系列，適用于蛋白質(zhì)和多糖的純化。即丙烯酰胺和少量交聯(lián)劑亞甲基雙丙烯酰胺在催化劑TEMED和氧化劑過(guò)硫酸銨作用下聚合形成凝膠。今天我們來(lái)看看PAM凝膠的兩種電泳形態(tài)。
變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)是基于寡核苷酸的大小，所以全長(zhǎng)產(chǎn)物可以從不完整的短分子中分離出來(lái)。通常，在電泳過(guò)程中，每個(gè)泳道中加入至少1毫克的合成寡核苷酸。電泳后，寡核苷酸帶位于紫外燈下，從凝膠上切下正確長(zhǎng)度的寡核苷酸。原理：蛋白質(zhì)或多肽與SDS結(jié)合，經(jīng)過(guò)熱變性和二硫鍵還原，形成負(fù)電荷相對(duì)一致的未折疊衍生物，其遷移速度主要由分子量決定。
非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(Native-PAGE)，或活性電泳，用于對(duì)活性蛋白進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳，無(wú)需添加變性劑如SDS、乙醇等，常用于酶的鑒定、同工酶分析和純化。無(wú)SDS的天然pam凝膠電泳可以在電泳過(guò)程中保持生物大分子的天然形狀和電荷。它們的分離是基于電泳遷移率和凝膠分子篩作用的差異，因此可以獲得更高的分辨率，特別是電泳分離后，蛋白質(zhì)、酶等生物大分子的生物活性仍然可以保持，這對(duì)生物大分子的鑒定具有重要意義。該方法是將兩個(gè)相同的樣品在凝膠上電泳，電泳后將凝膠切成兩半，一半用于活性染色以鑒定特定的生物大分子，另一半用于染色所有樣品以分析樣品中各種生物大分子的類(lèi)型和含量。
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